ELISA測試的類型和示意圖

ELISA最初是由瑞典斯德哥爾摩大學的Eva Engvall和Peter Perlman以及荷蘭的Anton Schuurs和Bauke van Weemen獨立構思的。他們尋求一種能夠測定抗原或抗體存在的免疫檢測方法來取代放射免疫檢測，因為放射免疫檢測採用的是具有潛在危險的放射性標記抗原或抗體，因此他們設計了一種基於酶的替代品。

ELISA測試的類型

現在有四種主要的ELISA類型，直接法、間接法、夾心法和競爭法。下面的圖片說明了抗原的測定；然而，同樣的原理也適用於抗體的測定，只是抗原和一級抗體的作用相反。

ELISA直接法在ELISA直接法中，樣品中的抗原或抗體以非特異性方式直接吸附在包被板上。然後，將特異性測定抗體或抗原連接到孔中。之後，測定底物被用來產生可測量的顏色變化，並在讀板器上進行量化。由於這種檢測方法步驟少，速度快，而且比其他ELISA方法更少有機會引入錯誤。然而，由於吸附步驟是非特異性的，背景噪音可能很高。沒有二級抗體步驟意味著沒有信號放大，降低了檢測靈敏度。它還需要為每個所需目標創建共軛測定抗體/抗原。

ELISA間接法ELISA間接法，或稱iELISA，最初於1978年開發，用於檢測人血清白蛋白，其工作方式與ELISA直接法非常相似，只是增加了一個二級抗體步驟。這使得測試信號得到放大，克服了ELISA直接法的局限性。它還否定了對目標特異性共軛測定抗體/抗原的需要，因為共軛的二級抗體只需要對一級抗體具有物種特異性。如果總的樣品抗原被結合到包被板上，就像ELISA直接法一樣，背景噪音仍然是一個問題。然而，如果該檢測方法用於檢測樣品抗體，純化的目標抗原被塗在板上，而一級抗體來自於樣品。這大大減少了背景噪音，因此這些檢測方法在確定樣品中的抗體滴度時最受歡迎。 ELISA間接法的缺點包括方案時間較長，有更多出錯機會，以及可能與二級抗體產生交叉反應。

ELISA夾心法顧名思義，ELISA夾心法將抗原夾在抗體之間，該技術開發於1977年，可以採用ELISA直接或間接法的形式（上面描述的ELISA夾心法是基於ELISA間接法），除了抗原與檢測板的非特異性結合，捕獲抗體使其成為一個特異性的過程。這種組合進一步提高了檢測的靈敏度和特異性。然而，它們確實需要確定兼容的捕獲和測定抗體對才能有效地發揮作用，而且可能有交叉反應的問題。這種檢測方法通常也有最多的步驟，提供了更大的出錯機會。由於抗原結合步驟的選擇性，ELISA夾心法在抗原處於復雜混合狀態時特別有用，因為不需要純化抗原。

ELISA競爭法ELISA競爭法，也被稱為ELISA抑制法或ELISA阻斷法，可能是ELISA技術中最複雜的一種。最初是在1976年為檢測人類絨毛膜促性腺激素而開發的，該檢測方法通過檢測對預期輸出信號水平的干擾，產生一個反比關係。應用的樣品中目標物越多，測定的輸出信號就越低。其他ELISA方法也可以被改變為競爭法。這裡有兩個一般的原則：樣品抗原或抗體與參照物競爭，分別與有限數量的標記抗體或抗原結合；又或者，樣品抗原或抗體可以與標記參照物競爭，分別與有限數量的抗體或抗原結合。 ELISA競爭法與它所採用的形式一樣，具有一些相同的優點和缺點。然而，當抗原較小，限制了兩個抗體同時結合的能力（如ELISA夾心法所要求的），或者只有一個抗體可用時，它的作用就凸顯了出來。

ELISA測試的類型各有特點，選擇合適的測試方法是確保實驗結果準確的關鍵。無論是直接ELISA、間接ELISA、夾心ELISA還是競爭性ELISA，都有其獨特的應用場景和優勢。在實際操作中，研究人員應根據樣品類型、實驗目標和所需靈敏度等因素做出選擇。隨著生物技術的進步，ELISA技術也在不斷改進，為醫療、科研和公共安全等領域提供了強有力的支持。

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