NGS檢測的基本步驟

NGS（Next Generation Sequencing，下一代測序技術）是一種革命性的基因組學技術，它能夠高效、精確地對基因組進行大規模的測序，廣泛應用於基因組學、醫學診斷、農業研究等多個領域。 NGS檢測的基本步驟涵蓋了從樣本準備到數據分析的整個流程。

NGS檢測

一、樣本採集與預處理1、樣本採集：根據檢測目的，採集合適的生物樣本，如血液、組織、唾液等。 2、樣本預處理：對採集的樣本進行必要的處理，如提取DNA或RNA，去除雜質，確保樣本質量滿足測序要求。

二、文庫構建1、DNA/RNA片段化：將提取的DNA或RNA切割成適合測序的短片段，通常長度為幾十到幾百鹼基對。 2、接頭連接：在片段兩端添加測序接頭，這些接頭包含測序過程中所需的引物序列和測序機器識別的標籤。 3、擴增：通過PCR或其他擴增方法，增加文庫中DNA片段的數量，以便在測序過程中獲得足夠的信號。

三、測序準備1、文庫質量檢測：使用生物分析儀器檢測文庫的質量，包括片段大小分佈、濃度等。 2、測序平台選擇：根據測序需求和成本考慮，選擇合適的測序平台，如Illumina、Ion Torrent、PacBio等。

四、測序反應1、測序芯片或測序流池準備：將文庫加載到測序芯片或測序流池中，為測序反應做準備。 2、測序反應：在測序機器中，通過邊合成邊測序（SBS）或其他測序方法，逐個鹼基地讀取DNA片段的序列信息。測序過程中，測序儀器會記錄每個鹼基的信號強度，用於後續的數據分析。

五、數據分析1、原始數據處理：將測序儀器生成的原始數據（如FASTQ文件）進行質量過濾和去噪，以提高數據質量。 2、序列比對與組裝：將過濾後的序列與參考基因組進行比對，或進行無參考基因組的組裝，以獲取樣本的基因組序列信息。 3、變異檢測：通過比對結果，檢測樣本中存在的單核苷酸多態性（SNP）、插入/缺失（INDEL）、結構變異等遺傳變異。 4、生物信息學分析：根據檢測到的變異信息，進行基因功能註釋、通路分析、疾病關聯分析等，為後續的醫學診斷、藥物研發等提供科學依據。

六、報告與解讀1、生成報告：將測序結果和分析結果整理成報告，包括樣本信息、測序質量、變異檢測結果等。 2、結果解讀：根據報告內容，結合臨床或研究背景，對測序結果進行解讀，提出相應的醫學建議或研究結論。

NGS檢測技術涵蓋了多個至關重要的基本步驟，包括樣本採集與預處理、文庫構建、測序準備、測序反應、數據分析，以及最終的報告解讀，每一環節都對測序結果的準確性和可靠性產生深遠影響。隨著技術的持續進步，NGS檢測在基因組學、個性化醫學、疾病診斷等多個領域展現出了廣闊的應用前景。

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